实验外包——8种裂解液该怎么选?
发布时间:2025-11-04
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作者:东极药物
一、RIPA 裂解液(强/中)【原理】利用表面活性剂裂解细胞膜(含核膜),从组织或细胞抽取可溶性蛋白。【组分】25mM Tris-HCl(pH 7.6),150mM NaCl, 1%NP-40,1%去氧胆酸钠,0.1%SDS等(组分影响裂解强度)。【特···
一、RIPA 裂解液(强/中)
【原理】利用表面活性剂裂解细胞膜(含核膜),从组织或细胞抽取可溶性蛋白。
【组分】25mM Tris-HCl(pH 7.6),150mM NaCl, 1%NP-40,1%去氧胆酸钠,0.1%SDS等(组分影响裂解强度)。
【特点】裂解强度分强、中、弱;裂解效果好,适合复杂蛋白提取;对蛋白质变性干扰小,含保护剂减变性;简便,常室温操作。
【用途】WB、IP、Co-IP实验。
二、SDS 裂解液
【原理】表面活性剂降低细胞膜表面张力、破坏结构,释放细胞内容物,可裂解核膜。
【组分】250mM Tris(pH7.4),10%SDS, sodiumfluoride、EDTA等。
【特点】亲水性强;乳化、分散能力强,能分散油、脂等;生物降解性好。
【用途】WB、IP、Co-IP、ELISA实验
三、Tris-Triton 裂解液
【原理】Triton X-100破坏脂质双分子层,溶解胞质和细胞膜,蛋白酶抑制剂抑制蛋白降解、维持蛋白相互作用。
【组分】10mM Tris(pH 7.4),100mM NaCl, 1mM EDTA,1mM EGTA,1% Triton X-100,10%甘油,0.1%SDS,0.5%去氧胆酸钠。
【特点】裂解条件温和,不破坏蛋白质结构,较好保持蛋白质活性。
【用途】WB、IP实验。
四、ACK 裂解液
【原理】氯化铵使细胞内外离子浓度差、渗透压差,让红细胞膨胀裂解。
【组分】150mM NH4CL,10mM KHCO,0.1mM Na2EDTA。
【特点】裂解能力高效,耐热性好;可能有毒,需通风环境操作。
【用途】经酶消化分散的组织细胞分离纯化、淋巴细胞分离纯化,及组织细胞蛋白与核酸提取中红细胞去除。
五、NP-40 裂解液
【原理】NP40蛋白与DNA结合致其性质变,使双链DNA断裂,分离蛋白与DNA。
【组分】50mM Tris-HCl(pH 8.0),150mM 氯化钠,1%NP-40
【特点】表面活性、溶解性、渗透性等优异,生物体系相容性较高。
【用途】WB、IP、Co-IP实验。
六、Urea 裂解液体
【原理】利用尿素渗透压特性使细胞膜破裂,释放细胞内物质。
【组分】Urea、阳离子表面活性剂(CHAPS等)、Tris-HCI缓冲液。
【特点】裂解强度温和,不破坏蛋白或DNA结构,保留生物活性分子;裂解效率高,可控。
【用途】蛋白质提取实验。
七、Tris-HCl 裂解液
【原理】Tris缓冲液维持pH,加盐和去垢剂破坏细胞膜和细胞器,释放蛋白质。
【组分】NaC1、去污剂(Triton X-100/NP-40)、蛋白酶抑制剂、RNase抑制剂。
【特点】裂解能力温和,不破坏蛋白和核酸结构;pH 缓冲能力好、可调节。
【用途】PAGE、WB、IP、Co-IP实验,蛋白与多肽分离纯化
八、WB/IP 裂解液
【原理】非变性条件下裂解,高效溶解细胞蛋白,不释放染色体组DNA、不破坏蛋白复合物。
【组分】20mM Tris(pH 7.5),150mM NaCl, 1%Triton X-100,及sodium pyrophosphate, β-glycerophosphate,EDTA,Na3VO4,leupeptin等。
【特点】裂解能力温和,维持蛋白间相互作用。
【用途】WB、IP、Co-IP实验。
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